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2010-07-28 小鼠骨髓的染色体制备
小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性,并且数量非常多,因此不必进行体外培养,可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,阻断纺锤丝的形成,使细胞分裂停止于中期,此时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂,便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血病的研究,也可用于观察毒性物质对机体遗传物质——染色体损伤的状况。
2010-07-28 人外周血染色体制备和体外培养细胞的染色体标本制备
人的外周血淋巴细胞培养方法是1960年由Moorhead 提出来的。正常情况下,人外周血小淋巴细胞都处在G1期(或G0期),但在体外给予一定的条件,进行培养,经72 h就可获得大量的有丝分裂细胞。这种取材简易、用血量少的培养方法已被广泛采用。
2010-06-21 人和哺乳动物原代细胞的蛋白质抽提步骤
一、培养的贴壁原代细胞的蛋白质抽提基本步骤 1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。 2、预冷的1×PBS(pH 7.4)清洗贴壁的细胞2次,小心倾去PBS。 3、蛋白质抽提试剂(1ml抽提试剂中加入5μl蛋白酶抑制剂混
2010-04-06 人癌细胞染色体制备及观察
目前大多数癌症都建立了相应的细胞株或细胞系,体外培养的癌细胞多属于连续的周期细胞,可以用来制备染色体。国内外制备动物和人类染色体的常规方法是空气干燥法
2010-04-06 细胞、细胞器及组分的分离与观察(叶绿体、线粒体和细胞核)
叶绿体的分离与荧光观察:叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器,能发生特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿体,其分离在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行,目的是为了防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。 线粒体和细胞核的制备与观察:利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异,可采取分级差速离心的方法,将细胞核与线粒体逐级分离出来(差速离心技术)。
2010-04-05 染色体的标本制作及其组型实验
凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌操作,易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面,精巢又比骨髓要简易一些,故本实验也选用小鼠的精巢为实验材料。
2010-04-01 线粒体(mitochondria)的分离与观察
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。制备线粒体时,可将组织匀浆液悬浮在悬浮介质中进行差速离心法进行分离。在一定的离心场中(选用离心机的一定转速),大小不一的颗粒沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度。
2010-03-28 动物染色体标本(cell chromosome)的制备与观察
凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本。
2010-03-28 动物骨髓细胞染色体的制备与观察
骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞,从这些分裂细胞中,可观察到处于分裂中期的染色体,能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少,效果差,因此要对骨髓细胞进行必要的处理。这个处理方法称为低渗法,其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。
2010-03-28 细胞膜的通透性观察实验原理和操作步骤
细胞膜的通透性观察实验原理和操作步骤
2010-03-28 动物染色体标本的制备
动物染色体标本的制备
2010-03-28 植物原生质体(protoplast)的制备
去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作,也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker(1892),直到1960年英国科学家Cocking才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料,利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁,分离细胞。
2010-03-20 细胞破碎(cell disruption)
细胞破碎就是采用一定的方法,在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜,设法使胞内产物最大程度地释放到液相中,破碎后的细胞浆液经固液分离除去细胞碎片后,再采用不同的分离手段进一步纯化.
2010-03-18 制备细胞裂解液(CELL LYSATE PREPARATION PROTOCOL)
制备细胞裂解液(CELL LYSATE PREPARATION PROTOCOL)
2010-03-18 细胞裂解液(Cell Lysis Solution)的制备
细胞裂解液(Cell Lysis Solution)的制备
2010-03-01 细胞核与线粒体的分级分离
通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分,以了解其原理及过程。
2010-03-01 染色体制备过程中的滴片方法
染色体制备过程中的滴片方法
2010-03-01 一种快速外周血淋巴细胞染色体的制备方法
目的 探讨快速人外周血淋巴细胞染色体制备方法的可靠性。 方法 采用快速法从人外周血样品中制备染色体,并对制备的染色体质量进行分析。 结果 快速法制备出了高质量的外周血淋巴细胞染色体。 结论 快速人外周血淋巴细胞染色体制备方法可靠,结果的重复性和一致性好,是染色体制备的理想方法。
2010-03-01 骨髓染色体分析方法——快速法
骨髓染色体分析方法——快速法
2010-03-01 外周血染色体分析方法——快速法
外周血染色体分析方法——快速法

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