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2010-05-21 DNA酶切及凝胶电泳实验原理、仪器试剂和操作步骤
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此他们能以相同的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下,DNA 分子的迁移速度取决于分子筛效应,即DNA 分子本身的大小和构型。
2010-04-29 质粒DNA的限制性内切酶(restriction endonuclease, RE)酶切及酶...
限制性内切酶(restriction endonuclease, RE)能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。限制性内切酶可分为三类:I、Ⅱ和III类。I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作用和依赖于ATP的切割。I类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。I和III类酶在分子克隆中都不常用。
2010-04-06 质粒DNA的酶切原理和操作步骤
II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断,形成粘性末端或齐平末端,通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。
2010-04-05 质粒DNA限制性酶切及琼脂糖凝胶电泳分离鉴定
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:I类和III类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。III类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。
2010-03-29 DNA限制性内切酶酶切分析
限制性内切酶和基因载体是DNA重组技术中的两个极其重要的方面。限制性内切酶是首先在大肠杆菌中发现的能够分解外来DNA的核酸酶。与核酸外切酶相比,该酶可从DNA双链内部特异的核苷酸序列处将DNA双链切断,产生带有粘性或平头末端的DNA片段。
2010-03-23 DNA的酶切实验原理和操作步骤
利用限制性内切酶切割DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一。成功的酶切为后续工作提供了有效的实验材料。限制性内切酶是细菌体内限制修饰系统内部切断的内切酶。在酶切反应中,DNA的纯度、缓冲液中的离子强度、Mg2+等因素均可影响反应,一般可通过增加酶的用量,延长反应时间等措施以达到完全酶切。
2010-03-21 酶切片断的脱磷技术
在对DNA片段的修饰中,脱磷酸化反应是一个重要内容,该反应有碱性磷酸化酶催化,该酶可使线状DNA上去除5'磷酸基团,而DNA的脱5'磷酸基团是基因重组、载体构建中防止载体DNA自身联接、环化的重要途径,载体经单酶切线性化后,3’端为羟基、5’端为磷酸基,在连接酶作用下将以极大比例发生载体自连,而5’脱磷后,载体在5’与3’位均为羟基不能自连只有与带5’磷酸基的外源片断连接,载体与外源片断间形成一个磷酸二脂键和一个缺口,缺口在转移进细胞后修复.另外脱磷作用还可发生在RNA、DNA、三磷酸腺苷、脱氧三磷酸腺苷的5’端,这个反应是进行探针标记操作中的重要环节。
2010-03-21 DNA片断的酶切技术
限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用促进了以DNA重组为基础的生物工程技术的迅猛发展。本部分实验主要通过EcoRⅠ,Hind III两种限制性内切酶对λDNA的单酶切、双酶切及部分酶切的操作,使学员能掌握内切酶的实验操作技术
2010-03-21 质粒DNA限制性酶切图谱分析
质粒DNA限制性酶切图谱分析 核酸限制性内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶,这些酶都是从原核生物中发现,它们的功能犹似高等功物的免疫系统, 用于抗击外来DNA的侵袭。 限制性内切酶以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键, 产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH。
2010-03-08 总DNA质量检测及酶切
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA 分子,然后从底物上解离。
2010-03-07 DNA的限制性内切酶酶切(restriction endonuclease,RE)分析
限制性内切酶(restrictionendonuclease,RE)是由细菌自己产生的能识别双链DNA分子中的特定碱基顺序,并以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键的核酸水解酶。本实验是将实验十制备的人Bcl-2重组质粒DNA作为EcoRⅠ酶切底物。
2010-03-07 DNA的酶切消化与凝胶回收
限制性内切酶是分子操作中重要的工具酶,是一类能够识别双链DNA分子某种特定的核苷酸序列并切割双链DNA分子的核酸内切酶。DNA分子经限制性内切酶消化以后,产生不同大小的DNA片段,我们需要从中分离出所需的目的片段,进一步做亚克隆或用作探针。
2010-03-07 DNA的限制性酶切和琼脂糖电泳
限制性内切酶特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上,并在此处切割双链DNA。DNA的电泳有琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳,它们是分离、鉴定和纯化DNA片段的标准方法。
2010-03-06 DNA的酶切实验
采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。
2010-03-06 质粒DNA的限制性内切酶酶切分析
限制性核酸内切酶:是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。
2010-03-06 Restriction digestion(酶切)
Restriction digestion(酶切)
2010-03-05 UV Shadowing
UV Shadowing
2010-03-05 DNA分子的限制性内切酶(Restriction enzyme , endonuclease)消化
1个单位限制性内切酶是指在最适条件下,在50μl体积1小时内完全切开1μgλ噬菌体DNA 所需的酶量。不同的限制性内切酶生产厂家往往推荐使用截然不同的反应条件,甚至对同一种酶也如此。
2010-03-05 Thermal Inactivation
Thermal Inactivation
2010-03-05 T-RFLP简介
T-RFLP的技术原理是根据的保守区设计通用引物,其中一个引物的5‘末端用荧光物质标记,常用荧光物质有HEX,TET,6-FAM等。

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