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2010-05-24 DNA片段的琼脂糖凝胶电泳原理和操作步骤
琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术,可用于分离,鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等),有不同的迁移率,所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合,在紫外灯下可看到荧光条带,籍此可分析实验结果。
2010-05-24 琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)
琼脂糖电泳具有以下优点:①琼脂糖含液体量大,可达98%~99%,近似自由电泳,但样品的扩散度比自由电泳小,对蛋白质的吸附极微;⑦琼脂糖作为支持体有分辨率高、重复性好等优点;③电泳速度快;④透明而不吸收紫外线,可以直接用紫外检测仪作定量测定;⑤区带可染色,样品易回收,有利于制备。缺点是琼脂糖中有较多硫酸根,电渗作用大。
2010-05-09 DNA片段的琼脂糖凝胶电泳(附视频操作)
琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术,可用于分离,鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等),有不同的迁移率,所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合,在紫外灯下可看到荧光条带,籍此可分析实验结果。
2010-04-22 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
根据DNA分子量不同,采用外加电场使其分开,用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
2010-04-10 核酸凝胶电泳观察法
琼脂糖是海藻中提取的线状高聚物,不同浓度的琼脂糖密度不同,一般PCR产物使用2%浓度,0.5Kb-10Kb的DNA使用1%浓度,基因组DNA使用0.3%-0.7%浓度;不同大小的核酸在同一浓度的凝胶中迁移率不同,因为分子越大其受琼脂糖的阻力越大,迁移率与碱基对的对数值成反比;同分子量不同构象的核酸迁移率也不同,超螺旋环状DNA迁移率〉线状DNA迁移率〉带切口环状DNA迁移率。
2010-04-08 核酸蛋白转移电泳及杂交(Southern Blot、Northern Blot和Western...
一、DNA Southern Blot及杂交 二、RNA Northern Blot及杂交 三、蛋白Western Blot及分析
2010-04-08 琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)检测DNA
琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物,可作为电泳支持物,适用于分离大小范围在0.2-50kb的DNA片段。DNA分子的迁移率与分子量的对数值成反比关系。观察其迁移距离,与标准DNA片段进行对照,就可获知该样品分子量大小。
2010-04-08 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测DNA
闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同,在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率,因而在紫外灯下观察,能区别闭合环状质粒 DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。
2010-04-06 从琼脂糖凝胶(Agaros gel)中回收DNA片段
限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后,按分子量大小被分开,排列在琼脂糖凝胶中,可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来,加热或用特殊的试剂熔解凝胶,使DNA溶回到溶液中,再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。
2010-04-06 质粒DNA的抽提、沉淀及琼脂糖凝胶电泳
在DNA的粗提液或其他的DNA反应体系中,一般都混有蛋白质、寡糖苷酸等杂质。琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的常用方法。质粒(plasmid)通常指细菌中独立于染色体外,能自主复制的遗传因子,它能够稳定地遗传某些性状。天然的质粒都是环状双链DNA,大小从 5kb到400kb不等
2010-03-29 DNA琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分析
一、原理
2010-03-29 DNA的凝胶电泳(gel electrophoresis)
琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶是分离和纯化DNA片段的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳适用于分离小分子的核酸;琼脂糖凝胶孔径较大,被应用于大分子核酸的分离和纯化。在一定浓度的琼脂糖凝胶介质中,DNA分子的电泳迁移率与其分子量的常用对数成反比。
2010-03-27 单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)的原...
单细胞凝胶电泳分析(single cell gel eletrophoresis,SCGE)的原理及特点
2010-03-26 多聚酶链式反应(PCR)基因扩增及琼脂糖凝胶电泳检测
多聚酶链式反应( PCR) 基因扩增及琼脂糖凝胶电泳检测 PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段,即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成。基本原理及过程如下:PCR循环过程中有三种不同的事件发生:(1)模板变性;(2)引物退火;(3)热稳定DNA聚合酶进行DNA合成。
2010-03-24 脉冲场凝胶电泳(PFGE)实验原理、操作步骤和注意事项
大分子DNA(一般长度超过20kb,在某些情况下,超过40kb)在电场作用下通过孔径小于分子大小的凝胶时,将会改变无规卷曲的构象,沿电场方向伸直,与电场平行从而才能通过凝胶。此时,大分子通过凝胶的方式相同,迁移率无差别(也称“极限迁移率”),不能分离。脉冲场凝胶电泳技术解决了这一难题,它应用于分离纯化大小在10~2000kb 之间的DNA 片段。
2010-03-24 DNA Polyacrylamide Gel Electrophoresis(DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳)
DNA Polyacrylamide Gel Electrophoresis(DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳) How to pour and run a neutral polyacrylamide gel. Buffers and Solutions Acrylamide:bisacrylamide (29:1) (30% w/v)
2010-03-22 琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄体会
拍摄前准备:在相机的机身(Nikon F3) 与镜头(Nikon Micro2 Nikkor F = 50mm)之间加上能使装载标本的琼脂糖充满取景画面的近摄接圈,镜头前要加装红滤色镜,装好黑白胶卷,再将照相机固定在翻拍架上。其次将紫外光灯箱的屏面向上,平放在翻拍架的平台上。
2010-03-22 琼脂糖凝胶电泳实验原理和实验方法
电泳是现在用于分离和纯化DNA片段的最常用技术。当装备一块“胶”即包含电解质的多孔支持介质并把它置于静电场中,DNA分子将向阳极移动,这是因为DNA分子沿其双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基。当DNA长度增加时,来自电场的驱动力和来自凝胶的阻力之间的比率就会降低,不同长度的DNA片段就会表现出不同的迁移率。
2010-03-21 质粒DNA的限制性酶切及电泳分析
限制性核酸内切酶能特异地识别和切割双链DNA中的碱基顺序,本实验中所用的pBS-SK质粒分子总长约2.9kb,经酶HindⅢ切割后,闭合环状质粒DNA即变成线性DNA分子。
2010-03-20 质粒酶切电泳注意事项
质粒酶切电泳注意事项

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