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2013-11-28 pLKO.1 - TRC Cloning Vector
[pLKO.1 - TRC Cloning Vector]?A.pLKO.1-TRCCloningVectorA.1TheRNAiConsortiumThepLKO.1cloningvectoristhebackboneuponwhichTheRNAiConsortium(TRC)hasbuiltalibraryofshRNAsdirectedagainst15,000humanand15,000mousegenes.……[ ]……
2013-11-28 Recombineering/Lambda red-mediated gene replacement
[Recombineering/Lambda red-mediated gene replacement]?OverviewSingle-geneknockoutsusingλredsystem,adaptedfromDatsenkoandWannerpaper.ThegoalofthisprotocolwastocreateanendA(endonucleaseI)knockout,butobviouslyitcanbeadaptedtoanygene.Thek……[ ]……
2013-11-28 先进科技 抢先体验
[先进科技 抢先体验]?先进科技抢先体验你还在为你的核酸提取发愁吗?你还在为你的科研经费发愁吗?东西越贵就一定越好吗?不!体验一下BioTeke给你带来的从核酸提取、PCR、RT-PCR到荧光定量的完美解决方案吧!?¤你知道如何保护样品的RNA不降解吗?已经有很多人在用了,如果你还不知道,赶快行动吧!?????RNAfixer无液氮RNA样品储存液:常温运送样品的最佳选择,保护RNA不降解,37℃一天,25℃一周,4℃一个月。原价:28……[试剂盒 荧光 棉花 血浆 ]……
2013-11-28 毕氏酵母氯化锂转化法
[毕氏酵母氯化锂转化法]?试剂1MLiCl用去离子蒸馏水配制,0.22um滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释50%PEG3350SigmaP3640?用去离子蒸馏水配制,0.45um滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装(氯化锂转化法只能PEG3350,不能用PEG8000,PEG3350在北京莱博生物有售,80元/100克)2mg/mlsalmonspermDNA/TE(10mMTris-Cl,pH8.0,1.0……[酵母 缓冲液 菌体 培养基 酵母]……
2013-11-28 蛋白印迹(Western Blot)常用试剂
[蛋白印迹(Western Blot)常用试剂]蛋白印迹(WesternBlot)常用试剂蛋白抽提???货号品名规格价格备注WB003组织蛋白抽提试剂100ml300全蛋白抽提WB004RIPA裂解液100ml100全蛋白抽提WB005细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂100次680WB006膜蛋白和胞质蛋白抽提试剂100次680WB007改良Western及IP细胞裂解液100ml320WB008蛋白酶抑制剂(……[培养液 血清 染色 试剂盒 ]……
2013-11-28 重组质粒的转化、筛选和鉴定
[重组质粒的转化、筛选和鉴定]?一、实验目的1、学习克隆工作中最常用的双酶切;2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术;3、学习氯化钙法制备大肠杆菌(Escherichiacoli)感受态细胞的技术;4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。6、学习鉴定重组子的方法。二、实验原理重组子的建立:采用双酶切质粒载体pBR322和pUC18,酶切后产生了互补的粘性末端,在T4……[质粒 感受态 重组质粒 重组子 重组质粒]……
2013-11-28 STANDARD PLANT MOLECULAR BIOLOGY PROTOCOLS
[STANDARD PLANT MOLECULAR BIOLOGY PROTOCOLS]?AGROBACTERIUMCOMPETENTCELLSYoushoulddoubleupthisprotocol-itisalmostthesameamountofworkandyoucanthusgetsome80tubes.1.InoculatecolonyO/Nin2mlYEP+antibioticsat28Cshaker.ABI-50KA……[ ]……
2013-11-28 酵母遗传学技术
[酵母遗传学技术]???Genome-wideGeneExpressionAnalysis(RichardYoungResearchGroup,WhiteheadInstituteforBiomedicalResearch)Agenoe-widegeneexpressionanalysisusinghigh-densityoligonucleotidearrays???RestrictionDig……[ 酵母 遗传学]……
2013-11-28 慢病毒RNAi干扰
[慢病毒RNAi干扰](1)原理慢病毒是逆转录病毒的一种,具有逆转录病毒的基本结构,但也有不同于逆转录病毒的组份和特性,作为基因治疗(genetherapy)载体发展起来,最近已用于转基因动物(Transgenicanimals)制备。利用慢病毒构建的shRNA/miRNA载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,lentivirus-shRNA/miRNA克隆经过慢病毒包装系……[质粒 逆转录病毒 转染 目的基因 ]……
2013-11-28 常用的分子生物学基本技术(三)
[常用的分子生物学基本技术(三)]?参考文献:[1]DonohoeGGetal.ClinChem,1999,45(1):143~146[2]GrossmanPD.NucleicAcidsRes,1994,22:4527~4534[3]BartaCetal.JChromatogrA,1998,817(1-2):281~286[4]MitchellCEetal.AnalBiochem,1995,224:148~153……[ 分子生物学]……
2013-11-28 真核细胞DNA的制备与定量
[真核细胞DNA的制备与定量]?制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤,通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素,以保证DNA的完整性,为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后可用于South……[氯仿 乙醇 水相 电泳 真核细胞]……
2013-11-28 IPTG诱导蛋白表达的原理及方法步骤
[IPTG诱导蛋白表达的原理及方法步骤]?E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达。在没有……[操纵子 乳糖 阻遏蛋白 缓冲液 蛋白表达]……
2013-11-28 Rules of siRNA design for RNA interference (RNAi)
[Rules of siRNA design for RNA interference (RNAi)]?GeneralGuidelinessiRNAtargetedsequenceisusually21ntinlength.Avoidregionswithin50-100bpofthestartcodonandtheterminationcodonAvoidintronregionsAvoidstretchesof4ormorebasessuchasAAAA,……[ ]……
2013-11-28 Selection of Transfected Suspension Cells
[Selection of Transfected Suspension Cells]1)Transfectcells.2)Culturecells1-3passagesinaT-75flaskcontainingselectionmaterial(e.g.hygromycin,neomycin,etc)3)Pelletcellsandresuspendataconcentrationof1x105cells/mlinselectionmedia……[ ]……
2013-11-28 酵母双杂交系统
[酵母双杂交系统]??????????YeastTwo-HybridSystem(FinleyLab)Thisisoneofthemostcomprehensiveanddetailedguidetoyeasttwo-hybridsystemtechniquewithintroductiontoitsbackground.Thefollowingproceduresaredescribed……[ 酵母双杂交]……
2013-11-28 腺病毒(adenovirus)RNAi干扰
[腺病毒(adenovirus)RNAi干扰](1)原理腺病毒(adenovirus)(adenovirus,AV)是一种没有包膜的线状双链DNA,它能感染分裂细胞和非分裂细胞,在核内以神经元细胞的形式复制,存在多种AV血清型。到目前为止,构建的绝大多数载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方法取代E1或E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在表达高水平E1和E3基因的细胞中复制,因此适合应用于治疗的高效控制系统。腺病毒(adenovirus)载体能够高效传递和表达基因……[腺病毒 质粒 血清型 转染 腺病毒]……
2013-11-28 Titration of Lentiviral Vectors
[Titration of Lentiviral Vectors]?Day1(9-12am)plate30.000293tperwellon24wellplatein1mlmedium/well?Day2(4-6pm)countcellson1well(shouldhave60-80.000)transducethecellswith6,4-foldserialdilutionsin250?totalvol;take……[ ]……
2013-11-28 CaPO3 Transfection in 293 T cells
[CaPO3 Transfection in 293 T cells]?24hoursbeforetransfecting,plateoutcellsat1.25x105/wellina6wellplate(106/100mmplate).Thedensityshouldbeabout25%.Toolow―thecellswilldie;toohigh―theywilllabelinefficientlyandover……[ ]……
2013-11-28 DNA纯化和浓缩新方法:超滤
[DNA纯化和浓缩新方法:超滤]?AmiconUltra-0.5mLCentrifugalFiltersforDNAPurificationandConcentration操作示意图:Withtheirverticalmembranedesign,AmiconUltra0.5mLfiltersdelivergreatperformanceandlowerspintimes?Concentrates……[ 超滤]……
2013-11-28 shRNA 苷酸序列的设计方法
[shRNA 苷酸序列的设计方法]?shRNA苷酸序列的设计方法设计方法确定一段合适的21个碱基的靶序列是有效的敲低某个基因的非常重要的第一步。现在一些互联网上的服务器能够帮助提供一些线索。例如,由Whitehead生物医学研究所(TheWhiteheadInstituteforBiomedicalResearch)设立和维护的siRNAext程序(http://jura.wi.mit.edu/siRNAext),登记个人信息后,便可免费使……[核苷酸 起始密码 碱基 嘌呤 ]……

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