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2010-04-05 植物体内可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法)
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0~100μg/ml),蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。
2010-04-05 蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)染色法
考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
2010-04-05 蛋白质的定量测定——紫外(UV)吸收测定法
蛋白质分子中所含酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质在280nm波长处有最大吸收值。在一定浓度范围内,蛋白质溶液的光吸收值(A280)与其含量成正比关系,可用作定量测定。紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速,简便,不消耗样品,低浓度盐类不干扰测定。因此,广泛应用在柱层析分离中蛋白质洗脱情况的检测。
2010-04-05 蛋白质的定量测定——福林酚法(Folin—酚试剂法)
Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。以后在生物化学领域得到广泛的应用。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
2010-04-05 蛋白质含量的定量测定——双缩脲法(Biuret法)
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似,也能与Cu2+形成紫红色络合物,其最大光吸收在540nm处。其颜色深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸的组成无关,该法测定蛋白质的浓度范围适于1~10mg /mL。双缩脲法常用于蛋白质的快速测定。
2010-04-05 蛋白质的定量测定——微量凯氏定氮法(micro Kjeldahl method)
生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义,如蛋白质的含氮量约为16%,测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定,通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于具有测定准确度高,可测定各种不同形态样品等两大优点,因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法
2010-04-04 蛋白质含量的测定—Folin-酚试剂法(Lowry法)和考马斯亮蓝法(Br...
蛋白质浓度可以从它们的物理化学性质,如折射率、比重、紫外吸收等测定而得知:或用化学方法,如定氮、双缩脲反应、Folin-酚试剂反应等方法来求算。其中双缩脲法和Folin-酚法是一般实验室中经常使用的方法。它们操纵简便、迅速,不需要复杂而昂贵的设备,又能适合一般实验室的要求,若作一般的浓度测定较为适应。Folin-酚法灵敏度高,较双缩脲法灵敏100倍。本实验采用的是Folin-酚法。
2010-04-04 紫外吸收法测蛋白质含量
1.280nm的光吸收法 2.280nm和260nm的吸收差法 3.215nm与225nm的吸收差法 4.肽键测定法
2010-04-04 绿色荧光蛋白测定(EGFP assay)
EGFP will be measured by direct visualisation with a UV microscope and the appropriate filters. By using an inverted microscope, we are able to assay the cells directly whilst they are still alive. The use of GFP (and its variants) has been a very powerful addition to the molecular biologist in recent years as real time experiments can be performed.
2010-04-04 蛋白质的定量测定实验(Lowry法、考马氏亮蓝G-250染色法、紫外分...
一、 Folin-酚试剂法(又名Lowry)法 二、考马氏亮蓝G-250染色法 三、紫外分光光度法 四、双缩脲法
2010-04-01 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
Folin-酚试剂法包括两步反应:第一步是在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物;第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin 试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。
2010-04-01 蛋白质标准曲线的制作
制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
2010-04-01 紫外分光光度法(ultraviolet spectrophotometry)测定蛋白质含量
考马斯亮兰G250与蛋白质结合,在0-1000ug/ml范围内,于波长595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮兰G250与蛋白质结合迅速,结合产物在室温下10分钟内较为稳定,是一种较好的蛋白质定量测定方法。
2010-04-01 凯氏定氮实验的原理与操作方法
待测天然含氮有机物与浓硫酸共热时,被氧化成为二氧化碳和水,而氮转变成氨,氨再与硫酸结合生成硫酸铵。为了加速有机物质的分解反应,在消化时常加入促进剂,硫酸铜可用作催化剂,硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点,氧化剂如过氧化氢也能加速反应。
2010-04-01 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)法测定蛋白质含量
考马斯亮蓝G- 250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该法是1976年Bradford 建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry 法还高4 倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
2010-04-01 食品中蛋白质含量测定(凯氏定氮法,Kjeldahl Method)
蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化,使蛋白质分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,留在消化液中,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再用盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即得蛋白质含量。
2010-04-01 LoWry法与劳里法测定植物体内可溶性蛋白质含量
LoWry法是双缩脲法(BIureT)和福林酚法(FolIn-酚)的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后,碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应,形成铜—蛋白质的络合盐。
2010-04-01 植物体内可溶性蛋白质含量的测定(福林-酚法)
该方法是双缩脲法的发展,包括两步反应: (1)在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。 (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。
2010-04-01 蛋白质定量分析(Protein determination)
蛋白质定量分析(Protein determination) Bradford 的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 (CBG) 可与蛋白质结合而变色的特性来定量 (Bradford, 1976);若试样中的蛋白质量较多,则结合到蛋白质而变色的CBG 也多,因而呈色较深。下例是以一组标准蛋白质为对象,制作一条蛋白质量与吸光度的标准校正线。
2010-04-01 酶活性分析(enzymatic activity analysis)法检定蛋白质
酶活性分析(enzymatic activity analysis)法检定蛋白质

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