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2010-05-21 蛋白表达系统研究进展
基因工程技术的核心是基因表达技术。至今,人们已建立了许多基因表达系统,既有原核生物基因表达系统,也有真核生物基因表达系统。不同的表达系统特点不同,有它们的优势,也有它们的不足。另外,由于研究深度的差异,它们的成熟程度和应用范围也很不一样。
2010-04-21 差异基因表达研究方法介绍(DD-PCR;GENE-FISHING;GENE CHIP)
DDRT -PCR技术即mRNA差异显示聚合酶链式反应技术,此技术是以PCR技术和聚丙烯凝胶电泳技术为基础,结合银染或放射性自显影等显色技术,能快速有效地鉴定并克隆两个或多个平行材料之间的差异表达基因。GeneFishing技术用来检测不同样品间的表达差异。该技术着眼于解决目前用来检测基因表达差异的方法所面临的问题,如芯片技术和差异显示技术。基因芯片技术的原理类似我们日常所说的计算机芯片,只是在固体基质上的不是集成着各种半导体管,而是成千上万的基因探针,待分析的样品通过和芯片中已知序列的DNA片段碱基互补杂交
2010-04-06 外源基因的诱导表达
外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长,lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖),解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-PAGE或Western-blotting检测。
2010-04-05 蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定
第一部分 蛋白质的表达、分离、纯化 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理,同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。 第二部分 蛋白质的鉴定 电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物,研究蛋白质的亚基组成等。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的孔径,蛋白质的电荷,大小,性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。
2010-04-04 在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略
国内针对外源基因在原核细胞中高效表达的关键因素,构建了高效表达载体[4],并在此基础上成功表达了一系列细胞因子的基因[5,6,7]。我们在分析了国内外有关在原核系统中表达蛋白的实验资料的基础上,对在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略所涉及的内容进行全面的总结,以期有助于我国在这方面的研究。
2010-04-04 毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统在外源基因表达中的研究进展...
摘要巴斯得毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统作为一个日臻完善的外源蛋白真核表达系统由于它所具有的一些其它表达系统不可比拟的优势而得到越来越广泛的应用。分别从该表达系统的优点、外源基因整合及调控机理、表达蛋白糖基化及翻译后修饰等方面综述了其在外源蛋白表达中的研究进展及应用。
2010-04-01 小鼠β-actin基因的克隆表达
动物组织RNA的提取 RT-PCR扩增目的基因及琼脂糖电泳分析 PCR扩增目的基因 PCR扩增目的基因 感受态细胞的制备及转化 克隆的筛选与鉴定 Southern 杂交 目的基因诱导表达和蛋白分离纯化 Western Blotting
2010-03-28 基因重组以及外源基因在大肠杆菌中的诱导表达
通过基因重组可将外源基因导入细胞,并使之进行扩增或表达。在生命科学的研究中,基因重组已经不仅是研究的目的(如基因工程的上游工程),而且日益成为一项重要的研究手段(如基因功能研究中将研究对象基因单独分离后重组,可以研究其表达、调控过程以及功能等),所以有着不可替代的地位
2010-03-28 限制性内切酶(restriction enzyme)酶谱分析
限制性内切酶在DNA上有特异的识别和切割位点,可将DNA切开而得到两个或两个以上的大小不同的片段,这些片段可通过电泳分离并检测其大小。双酶切法酶切图谱构建是使用两种不同的限制性内切酶对同一个DNA分子进行单酶切和双酶切,将所得的片段进行对比组装,对交替区域进行加减以确定酶切位点的相对位置。
2010-03-27 常用核酸和氨基酸代码
常用核酸和氨基酸代码
2010-03-27 在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略
本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征:操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养,它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。
2010-03-27 Protein Syntheses in Cell Free Systems
Protein Syntheses in Cell Free Systems
2010-03-27 Protein Expression and Purification of RPA70-AB (181-422)
Protein Expression and Purification of RPA70-AB (181-422)
2010-03-27 Co-Expression of human DNA primase p49-p58 subunits
Co-Expression of human DNA primase p49-p58 subunits
2010-03-27 Crystallization of Kinesin Family Motor Proteins
Crystallization of Kinesin Family Motor Proteins
2010-03-27 外源基因在大肠杆菌中诱导表达与检测
本实验利用已经构建好的表达载体,通过IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)的诱导,实现外源基因在大肠杆菌中的表达,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测外源基因的表达。
2010-03-27 Invitrogen公司Pichia酵母表达系统使用心得
甲醇酵母表达系统有不少优点,其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知,并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高,但是在实际操作中,并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。
2010-03-27 GST融合蛋白纯化:筛选表达株(Purification of GST fusion prote...
Purification of GST fusion proteins in E.coli GST Sugden lab,McArdle Laboratory for Cancer Research,University of Wisconsin-Madison Medical School Screen of GST-Fusion Protein Expression
2010-03-27 蛋白的生物活性测定方法(结晶紫法和MTT法)
结晶紫法活性测定 蛋白的生物活性及结构测定方法 MTT法——活性测定
2010-03-27 毕赤酵母表达(pichia pastoris expression )实验手册
一.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制 二.毕赤酵母表达的培养基配制 三.主要试验环节的操作 3.1 酵母菌株的分离纯化 3.2 pPICZαA原核宿主菌TOP10F’的活化培养 3.3毕赤酵母表达的试验方法 3.4 毕赤酵母电转化方法 3.5 Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法 3.6 毕赤酵母基因组提取方法 3.7 Mut+表型重组酵母的诱导表达实验

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