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2010-05-24 动物组织中DNA的制备
DNA是所有生物体的基本组成物质。真核生物DNA主要存在于细胞核中。制备DNA时应将细胞核膜打破方能释放出来。细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合,形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后,这两种核蛋白将混杂在一起。因此,要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开……
2010-05-24 紫外吸收法测定蛋白质含量
蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基,它们的结构中具有共轭双键,对紫外光有吸收作用,其最大值在280nm波长处。在此波长附近,蛋白质溶液的光吸收值与其含量(范围是0.1~1.0mg/ml)成正比,因此,280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。若将已知不同浓度的蛋白质标准溶液在280nm处测定,并作标准曲线,即可求得未知溶液的蛋白质浓度。此法测定迅速,用量较少,而且不消耗样品和试剂。但若样品中含有其他在280nm吸收的物质,如嘌呤嘧啶等化合物时,就有干扰作用。……
2010-05-24 DEAE—离子交换剂纯化血清IgG
离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离,而后流经固定相,使之与固定相上的可解离基团进行离子交换,吸附于固定相上,凡不能进行交换吸附的成分,则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度的差别,运用不同的pH值或不同盐浓度的溶液作流动相,流过层析柱将各组分分别再交换洗脱下来,这样混合物的各组分即被分开,达到分离的目的,此即为离子交换层析。……
2010-05-24 凝胶层析法脱盐和分离蛋白质(附凝胶过滤法原理及基本操作)
凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐”(desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过滤法则能将盐除尽,所需时间也短,但其凝胶过滤后样品体积较大。所以,要根据具体情况选择使用。前实验中样品体积较小,凝胶达滤后样品体积不会太增加,所以选用凝胶过滤法。……
2010-05-24 血清免疫球蛋白(Immunoglobulin,IgG)的分离制备—盐析法
IgG是免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称IgG)的主要成分之一,分子量约为15万~16万,沉降生活费数约为7s。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种,要从血浆中分离出IgG,首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序,使IgG在样品中比例大为增高,然后再纯化而获得IgG。……
2010-04-12 免疫球蛋白IgG的提取
抗体是在抗原物质刺激下,人或脊椎动物免疫系统的浆细胞产生的,能与抗原发生特异性反应的免疫球蛋白,主要存在于人和动物的血清及其体液中。……
2010-04-10 琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定
一、目的:……
2010-04-08 醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophores...
醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophoresis)以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm— 0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。……
2010-04-08 Affinity Column Preparation(亲和层析柱制备)
Affinity Column Preparation(亲和层析柱制备)……
2010-04-08 Sucrose Density Gradient Fractionation
Sucrose Density Gradient Fractionation……
2010-04-08 现代生物分离技术在多肽蛋白质分离纯化中的应用
双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似,都是依据物质在两相间的选择性分配,但萃取体系的性质不同。电泳是分离生化物质的一种有效的和多功能的方法。……
2010-04-08 纯化全长/高纯度蛋白方法(Double-tag)
纯化全长蛋白 最高纯度的蛋白 适合变性或生理条件下纯化 直接从培养基中纯化蛋白 Protein表达是一个非常复杂的过程,因此很难预测表达的蛋白是否是可溶性的、包涵体形式还是部分降解的。……
2010-04-08 Yeast mini whole cell extract using glass beads for western a...
Yeast mini whole cell extract using glass beads for western analysis……
2010-04-08 Purification of Calmodulin from Bovine Brain
Purification of Calmodulin from Bovine Brain……
2010-04-08 GST Fusion Protein Preparation
GST Fusion Protein Preparation……
2010-04-08 Purification of Myosin Light Chain Kinase
Purification Myosin Light Chain Kinase……
2010-04-08 Taq Polymerase Purification
Taq Polymerase Purification……
2010-04-08 蛋白质的浓缩技术
蛋白质的浓缩技术 (一)透析袋浓缩法 (二)冷冻干燥浓缩法 (三)吹干浓缩法 (四)超滤膜浓缩法 (五)凝胶浓缩法 (六)浓缩胶浓缩法……
2010-04-08 Fusion Protein Isolation(融合蛋白分离纯化)
Fusion Protein Isolation 融合蛋白分离纯化……
2010-04-08 GST-融合蛋白(GST fusion protein purification)的表达与纯化
GST纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。……

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