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2010-03-27 real-time PCR 常用仪器和探针
real-time PCR 常用仪器和探针: 1.SYBR Green I 2.Taqman探针 3.分子信标(molecular beacons) 4.杂交探针 5.Scorpion引物/探针
2010-03-27 RT-PCR实验方法简介
RT-PCR定义:是指对组织或细胞的总RNA进行抽提,把RNA反转录为cDNA,然后设计目的基因引物进行PCR,琼脂糖电泳并数码拍照,分析电泳条带灰度值,判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。
2010-03-24 RT-PCR在基因表达(gene expression)检测中的应用
随着重组DNA技术 的运用,现在有可能检测.分析任何基因的转录产物。目前有好几种方法广泛应用于 于研究特定RNA分子。这些方法包括原位杂交.NORTHERN凝胶分析.打点或印迹打 点.S-1核酸酶分析和RNA酶保护研究。这里描述RT-PCR从RNA水平上检查基因表达的 应用。
2010-03-23 RT-PCR原理与实验操作步骤
逆转录酶(reverse transcriptase)是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性: 1、依赖RNA的DNA聚合酶活性:以RNA为模板合成cDNA第一条链; 2、Rnase水解活性:水解RNANA杂合体中的RNA; 3、依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA.
2010-03-22 Real-Time RT-PCR
Real-Time RT-PCR Why Real-Time RT-PCR? Real-Time PCR Chemistries TaqMan Probes Molecular Beacons Scorpions SYBR Green Real-time Reporters for Multiplex PCR Quantitation of Results Standard Curve Method Comparative Ct Method Instrumentation for Real-Time PCR Tools for Real-Time RT-PCR End-Point RT-PCR: Relative vs. Competitive vs. Comparative Relative RT-PCR Competitive RT-PCR Comparative RT-PCR
2010-03-22 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法中常见的污染问题及对策
PCR方法中常见的污染问题及对策
2010-03-21 在MJ Chromo4实时荧光系统通过反转录定量(RT-qPCR)对基因表达进...
反转录定量PCR(RT-qPCR)具有很高的灵敏性和非常好的动力学检测范围,为基因表达分析提供了一个基准。应用这一技术可以通过荧光强度变化对PCR反应产物进行实时监测。所谓的实时荧光定量PCR就是通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。
2010-03-21 RT-PCR技术
目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中,基因表达产物方面的内容,这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、S1核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点,该技术提供给研究人员有效的进行测定转录产物存在与否、评估基因表达水平等方面的工作,并在不需要构建和筛选cDNA文库的前提下,完成对cDNA片段的克隆。利用RT-PCR技术分离目的基因是目前基因操作中最有效的途径,RT-PCR扩增产物经纯化、回收、与载体重组克窿,即可实现基因的分离。
2010-03-20 RT-PCR 实验原理与步骤
RT-PCR 比 Northern 杂交更灵敏,对 RNA 的质量要求较低,操作简便,它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。本实验以水稻叶片 RNA 为材料,检测β -actin 基因的表达。实验中设定2 个阴性对照:一个不加模板 RNA ,另一个不加反转录酶,主要是消除 DNA 及PCR 试剂方面引起的假阳性;同时以叶片 DNA 为阳性对照,检验 PCR 试剂和扩增过程是否有问题。
2010-03-19 RT-PCR实验原理与步骤
RT-PCR 是以RNA 为模板经逆转录反应(Reverse Transcription,RT)产生cDNA 第一链,再以cDNA 为模板进行PCR 扩增以检测目的基因的表达情况。
2010-03-18 RT-PCR引物的选择
RT-PCR引物的选择
2010-03-18 RT-PCR引物设计原则和方法
在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。
2010-03-17 定量PCR实验数据处理
2010-03-15 QRT-PCR protocol
QRT-PCR protocol Consistency is crucial to the accuracy of QRT-PCR, so the extra steps in this protocol are necessary. In general, be extra careful to treat every sample the same.
2010-03-15 RT-PCR引物的选择
2010-03-14 Sample Prep for Real-Time RT-PCR(Real-Time RT-PCR样品预处理)
Sample Prep for Real-Time RT-PCR(Real-Time RT-PCR样品预处理)
2010-03-13 RT-PCR原理与实验操作
RT-PCR原理与实验操作
2010-03-13 Real-time quantitative RT -PCR (Taqman)
Real-time quantitative RT -PCR (Taqman)
2010-03-13 Protocol for Real-Time RT-PCR
Protocol for Real-Time RT-PCR
2010-03-13 RT-PCR protocol
RT-PCR protocol

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