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2010-05-25 E 玫瑰花环形成试验(E Rosette Test)
正常人外周血中T 细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞团。这是因为人的T 细胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相结合的受体,称为E 受体。已证实E 受体是人T 细胞所特有的表面标志,因此本试验可作为人外周血T 细胞的鉴定和计数,同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标,也是分离T 细胞的常用方法之一。本实验为示教内容,学生只看结果。
2010-05-16 E-玫瑰花环形成实验(erythrocyte rosette test)
人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体,在体外一定条件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合,可以形成以T细胞为中心,周围黏附着多个绵羊红细胞的花环,为E花环试验(erythrocyte rosette test)。应用最广的有总E花环试验(Et,t为total的缩写)和活性E花环试验(Ea,a为active 的缩写)。 Et代表被检标本中T淋巴细胞的总数,Ea则反映具有高亲和力绵羊红细胞受体的T细胞数,这部分T细胞的免疫学功能更能反映机体细胞免疫功能和动态变化。 E花环试验主要用于了解机体细胞免疫功能。广泛应用于肿瘤免疫、移植免疫及免疫性疾病的研究,为某些疾病诊断和防治提供免疫学方面的重要参考。
2010-05-03 迟发型变态反应(DTH)检测:足跖增厚法
绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法) SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞,4天后,当再以SRBC攻击时,即可见攻击部位出现迟发型变态反应。
2010-05-03 NK细胞活性测定:LDH法原理和实验步骤
活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下,LDH不能透过细胞膜,当细胞受到NK细胞的杀伤后,LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢,进而使NAD还原成NADH,后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)还原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。
2010-05-03 细胞增殖检测:3H同位素渗入实例
淋巴细胞在有丝分裂原PHA、ConA 等的刺激下,产生增殖反应,DNA和RNA合成明显增加,如在培养液中加入3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR),则可被转化中的细胞摄入。测定标记淋巴细胞的放射强度可反映淋巴细胞增殖的程度。
2010-05-03 靶细胞杀伤实验总论
细胞介导的免疫反应(cell mediated immune, CMI)在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定,将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。
2010-05-03 细胞增殖检测:3H-TdR渗入法原理和操作步骤
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对 T、B细胞的增殖均有刺激作用。
2010-05-03 迟发型变态反应(DTH)检测:耳肿胀法
二硝基氟苯(DNFB)是一种半抗原,将其稀释液涂抹腹壁皮肤后,与皮肤蛋白结合成完全抗原,由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞。4~7天后再将其涂抹于耳部,使局部产生迟发型变态反应。一般在抗原攻击后24~48h达高峰,故于此时测定其肿胀程度。
2010-05-03 NK细胞活性测定:同位素法原理和实验步骤
将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时,靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来,其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。
2010-05-03 靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法
做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确。
2010-05-03 靶细胞杀伤实验:Cr51法
用Na2 51 CrO 4 标记靶细胞,若待检效应细胞能杀伤靶细胞,则51 Cr( 铬) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的51 Cr 放射活性,靶细胞溶解破
2010-05-03 靶细胞杀伤实验:LDH法
一、效应细胞的制备 二、靶细胞的制备 三、LDH释放法测定CTL的功能 四、计算CTL活性 五、统计学处理
2010-05-03 靶细胞杀伤实验:MTT和CCK8比较
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
2010-05-03 靶细胞杀伤实验:AnnexiV标记法
2010-05-03 细胞增殖检测:MTT实验经验总结
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下 tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将 MTT还原)。
2010-05-03 细胞增殖检测方法概论
一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法 二、MTT检测法 三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法 四、Brdu检测法
2010-05-03 细胞增殖检测:H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法材料和操作方法
一、材料及试剂
2010-05-03 细胞增殖检测:CFSE原理和CFSE配制
荧光染料CFSE, 也可称为CFDA SE(5,6- carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂,是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,这使得CFSE成为一种良好的细胞标记物。
2010-05-03 细胞增殖检测:BrdU
5-brdu 的分子量为307.1,将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol),溶于1ml三蒸水,分装-20度保存。用的时候再稀释100倍,如在1ml 溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量,如100ul,避免反复冻融使其活性降低。
2010-04-14 免疫检测的基础知识
ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。

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