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2010-05-24 聚合酶链式反应(PCR)技术
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是一种体外扩增特异性DNA片段的技术。它可以在体外特异地对目的基因进行大量扩增,其巧妙之处在预先设计合成二段分别与待测目的基因二端互补的引物,以起到指向定点的作用;再借助于DNA聚合酶催化的若干次扩增反应后,即可使特定的基因片段成百万倍的扩增。
2010-04-29 基因表达的半定量PCR检测
PCR技术又称聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)技术,是一种在体外(试管)扩增核酸的技术。该技术模拟体内天然DNA的复制过程。其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase)存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一循环的产物作为下一个循环的模板,如此循环30次,介于两个引物之间的新生DNA片段理论上达到230拷贝(约为109个分子)。
2010-04-05 PCR基因扩增
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一种体外核酸扩增系统,其原理类似DNA分子的天然复制过程,是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增 2n 倍。该技术已成为分子生物学中一种有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。
2010-04-03 多个短串联重复基因座的自动化检验
在一个PCR 体系中同时扩增多个基因座的方法叫做复合扩增(Multiplexing PCR)。STR的复合扩增增加了单次检测的信息量,提高了个人识别率,同时可降低成本和检材的消耗,因此显示出重要的法医学应用价值。其基本原理就是利用基因座内等位基因长度的不同;扩增的基因座之间片段长度范围的不同,采用高分辨率的毛细管电泳技术进行分离。同时,结合激光诱导荧光染料显带自动分析技术。
2010-04-03 PCR-SSP分析实验原理和步骤
根据决定某等位基因的碱基性质,设计3´端第一个碱基分别与各等位基因的特异性碱基相匹配的序列特异性引物,在PCR 反应过程中,只有引物3´端第一个碱基与决定特定等位基因的碱基互补时才能实现DNA 片段的完全复制,根据PCR 产物的有无进行等位基因的分型。
2010-04-03 限制性片段长度多态性(RFLP)分析
限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析技术是分子生物学的重要分析方法之一,用于检测DNA序列多态性。PCR-RFLP是将PCR 技术、RFLP 分析与电泳方法联合应用,先将待 测的靶DNA 片段进行复制扩增,然后应用DNA 限制性内切酶对扩增产物进行酶切,最后经电泳分析靶DNA 片段是否被切割而分型。
2010-04-03 vWF III位点扩增片段长度多态性试验
扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphisms,Amp-FLP)根据PCR技术原理,针对靶基因座的侧翼序列设计一对特异性引物,采用适当的PCR 反应体系和热循环条件,可扩增出该基因座等位基因。PCR 产物经电泳分离、显带后,杂合子为两条长度不等的片段,纯合子为一条片段。根据片段长度判定等位基因和基因型。
2010-03-30 分子标记——AFLP原理和操作步骤
AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。
2010-03-30 RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA.)
运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA.)该RAPD技术建立于PCR基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体)为引物,对所研究基因组DNA进行PCR扩增,聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离,经EB染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性,这些扩增产物DNA片段的多态性反应了基因组相应区域的DNA多态性。
2010-03-29 直接原位PCR(In situ PCR)操作方法
1.组织切片和细胞样品的制备 2.切片预处理(蛋白酶消化) 3.原位扩增(以标记生物素为例) 4.检测(以ABC法为例)
2010-03-24 植物RAPD(随机扩增多态性DNA)分析技术
RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA),意为随机扩增多态性DNA,是利用PCR技术进行随机扩增,把扩增的DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,根据DNA条带的多态性来反应模板DNA序列上的多态性。RAPD同AFLP、SSR等分子标记一样都基于PCR扩增,只是RAPD分析只需要一个引物,其引物长度一般为10个核甘酸,其序列是随机的,不同核甘酸序列的引物均有商品出售。
2010-03-24 适于RAPD分析的烟草DNA提取方法
随机扩增多态性DNA(Random amplified polymorphic DNA,简称RAPD)是Williams等1990年提出的一种分子标记技术。其原理是运用PCR,利用一系列不同的寡聚核苷酸单链为引物,扩增总 DNA中的一些片段。由于其具有快速有效、灵敏度高、无放射性污染、实验步骤简化、操作安全、成本低、速度快、结果易于传递等优点,是近年来发展得最快的一种分子标记技术。
2010-03-24 RAPD技术应用中的一些问题及对策
综述了RAPD技术的一些理论性问题,包括RAPD与其它分子标记技术相比的优点,影响结果重复性的因素,显性标记产生的原因,条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法:严格控制反应条件,采用单倍体和单剂量标记,系统学研究中要结合其它方法进行分析,定位基因时要选用合适的群体等。
2010-03-24 RAPD分析技术
RAPD(Random Amplifed Polymorphic DNA)就是其中的一种,它是1990年美国杜邦公司科学家 J. G. K. Williams和加利福尼亚生物研究所J. Welsh领导的两个小组几乎同时发展起来的一项新技术。Williams称之为 RAPD,Welsh叫它AP-PCR(Arbitrary Primer PCR)
2010-03-24 RAPD分子标记的实验原理及操作流程
RAPD分子标记的实验原理及操作流程 RAPD技术的全称是随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA),此技术建立于PCR基础之上,使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物,对基因组的DNA全部进行PCR扩增,以检测多态性。
2010-03-24 RAPD(随机扩增多态DNA)的方法和应用
DNA 分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。1990 年,Williams 和 Welsh 等人运用随机引物扩增寻找的多态性 DNA 片段作为分子标记,并将此方法命名为 RAPD(random amplified polymorphic DNA),即随机扩增多态性 DNA
2010-03-24 RAPD Protocol
RAPD Protocol
2010-03-24 分子标记的种类及其发展(RFLP、RAPD、SSRP、AFLP、SNP、STMS、SC...
广义的分子标记(molecular marker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。蛋白质标记包括种子贮藏蛋白和同工酶(指由一个以上基因位点编码的酶的不同分子形式)及等位酶(指由同一基因位点的不同等位基因编码的酶的不同分子形式)。狭义的分子标记概念只是指DNA标记,而这个界定现在被广泛采纳。
2010-03-24 RAPD-PCR
RAPD stands for Random Amplification of Polymorphic DNA. RAPD reactions are PCR reactions, but they amplify segments of DNA which are essentially unknown to the scientist (random).
2010-03-24 RAPD和ISSR技术
DNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为 RAPD(Random amplified polymorphic DNA ,随机扩增的多态性DNA)。在真核生物基因组中均存在着由1~4个碱基对组成的简单重复序列(Simple Sequence Repeats)简称SSR,又称之为微卫星(Microsatellite),如(GA)n、(AC)n、(GAA)n等。

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